热带作物学报

作者：王丽芳,彭耀,党向利,叶良,李双姣,许慧慧,杜鹃,董育德

单位：1.安徽农业大学园艺学院,安徽合肥 230036,2.安徽农业大学植物保护学院,安徽合肥 230036

关键词：蝉拟青霉,疏水蛋白,PChyd：表达模式,敲除载体

基金：国家自然科学基金项目(31201569),国家重点研发计划项目(2018YFD0300902-4),安徽农业大学稳定和引进人才项目(yj2014-7)

为深入研究昆虫病原真菌蝉拟青霉疏水蛋白PChyd基因的功能,根据蝉拟青霉基因组信息克隆疏水蛋白PChyd基因,对该基因序列进行生物信息学分析,使用qRT-PCR技术对其在不同培养条件或阶段下的表达模式进行分析,并通过酶切酶连的方法构建了该基因的敲除载体。结果表明：PChyd基因的开放阅读框序列全长303 bp,编码100 aa,包含22 aa的信号肽序列和70 aa疏水蛋白功能区域。系统发育分析显示该基因与粗糙虫草菌亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示PChyd基因在PDA培养的菌丝体、诱导的附着胞、诱导的芽生孢子中表达量显著高于另外2个样品,其中芽生孢子表达量最高,暗示该基因在蝉拟青霉侵染初期和在昆虫血腔中定殖阶段可能具有重要作用。凝胶电泳结果表明,成功构建了该基因的敲除载体,扩增出含有上臂、HPH、下臂的3356 bp左右的片段。本研究为进一步探究蝉拟青霉疏水蛋白PChyd基因的致病机理、生防工程菌的改造奠定了基础。

来源：2020年第7期

《热带作物学报》期刊编辑部

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