热带作物学报

作者：范璟璋, $\boxed{\hbox{华玉伟}}$, 范月婷, 辛士超, 戴雪梅, 黄天带, 黄华孙, 李季

单位：1.海南大学热带作物学院,海南海口 570228,2.农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所,海南海口 571101,3.华中师范大学附属息县高级中学,河南息县 464300

关键词：巴西橡胶树,GDS-80,基因枪,GFP基因,Image J

基金：国家自然科学基金项目(31770717),国家自然科学基金项目(31872708),中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630022019013),中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630022018001)

GDS-80手持基因枪是美国Wealtec公司2009年推出的基因传递系统,具有操作简便、高效的特点。已报道的橡胶树基因枪转化研究都是使用台式基因枪。本文首先利用考马斯亮蓝轰击滤纸去除明显不适合的参数,接着以绿色荧光蛋白（GFP）基因作为报告基因,轰击巴西橡胶树体细胞胚以及愈伤组织,用荧光显微镜观察绿色荧光,探究适合橡胶树的轰击参数。而且比较了Image J软件和肉眼统计荧光斑点数及GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪的差异。结果表明：对于橡胶树体细胞胚和愈伤组织,仅依靠原厂配件难以获得较好的转化效果。本文设计了直径3 cm（与轰击范围相同）,高度2.5 cm,孔径60目的过滤网。同时改进装试验材料的培养皿,用刀片在培养皿的中心割出一个直径3 cm的圆圈,轰击胚状体时,将上述设计的过滤筛网正向卡在圆圈上,胚状体放入过滤网中,轰击时将培养皿用试管架架高,压力就从筛网及底部的空洞分解,微弹完全轰击到试验材料。轰击胚状体最优参数为：轰击压力为60 psi,针状调节阀为3圈,目标间隔盘为6 cm。轰击愈伤时将材料放到普通培养皿中心的轰击范围内,反向盖上过滤筛网。最优轰击参数为：轰击压力为50 psi,针状调节阀为4圈,目标间隔盘为6 cm。本文采用Image J软件进行荧光斑点计数,准确率与肉眼相当,但较肉眼省时。GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪转化效率相当,但GDS-80手持基因枪每打一枪比PDS-1000/He台式基因枪快12 min。研究结果为橡胶树遗传转化提供了高效的基因枪转化体系,为转基因研究提供了一个高效的统计荧光数的软件。

来源：2021年第9期

《热带作物学报》期刊编辑部

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