热带作物学报

作者：张彤, 王亚杰, 郭文雅, 李瑞梅, 刘姣, 郭建春, 胡新文, 姚远, 耿梦婷

单位：1. 海南大学,海南海口 570228,2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南热带农业资源研究院,海南海口 571101

关键词：木薯,细菌性枯萎病,MeSWEET10a,CRISPR/Cas9

基金：海南省自然科学基金项目(320RC492),中国热带农业科学院基本科研业务费专项资金(1630052020033),海南省研究生创新科研课题(Hys2019-07)

木薯细菌性枯萎病（cassava bacterial blight, CBB）是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. Manihotis, Xam）引起的木薯重要病害,影响木薯产量,我国主栽的木薯品种均不抗Xam。Xam分泌的TAL20效应蛋白可结合木薯MeSWEET10a基因启动子的EBE区,激活该基因表达,促进糖类运输至Xam侵染的部位,为病菌的繁殖提供碳水化合物。本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0设计EBE区的基因编辑靶点,构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒pCAMBIA1301-Cas9-EBE-sgRNA。将重组质粒转化LBA4404根癌农杆菌,利用农杆菌介导法侵染木薯脆性胚性愈伤组织。提取侵染和未侵染的木薯脆性胚性愈伤组织DNA,PCR扩增靶点EBE区及潜在的脱靶位点,并进行Sanger测序分析编辑效果。结果发现EBE区被成功编辑,且没有脱靶现象。本研究有助于进一步获得MeSWEET10a基因启动子EBE区域的木薯突变体,以增强木薯抗细菌性枯萎病的能力。

来源：2021年第11期

《热带作物学报》期刊编辑部

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