热带作物学报

作者：杨秀坤, 沈文涛, 庹德财, 王赫, 言普, 黎小瑛, 朱国鹏, 周鹏

单位：1.海南大学园艺学院/海南省热带园艺作物品质调控重点实验室,海南海口 570228,2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口 571101

关键词：番木瓜畸形花叶病毒,HC-Pro,马铃薯Y病毒,蛋白纯化

基金：海南省自然科学基金高层次人才项目(320RC717),国家自然科学基金项目(32072390)

番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus, PLDMV）是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶（helper component- proteinase, HC-Pro）是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯化获得具有功能活性的HC-Pro蛋白,研究其多功能性具有重要意义。本研究利用In-Fusion拼接策略和E.coli Cell-Free快速构建植物病毒侵染性克隆法,一步快速地将28个氨基酸组成的蛋白标签Twin-Strep插入到PLDMV HC-Pro氨基端,成功获得了基于农杆菌的携带Twin-Strep标签的PLDMV侵染性克隆pPLDMV-Strep。通过农杆菌渗透注射接种番木瓜植株,从感染PLDMV-Strep的番木瓜叶片总蛋白中,利用Twin-Strep蛋白标签亲和层析分离纯化获得PLDMV HC-Pro蛋白,并通过LC/ESI-MS/MS（liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometric）对其进行蛋白N端和C端序列测序,证明了纯化获得完整的PLDMV HC-Pro蛋白。研究结果为后续解析PLDMV HC-Pro在病毒侵染过程中的功能及与寄主蛋白相互作用奠定了基础。

来源：2022年第4期

《热带作物学报》期刊编辑部

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