热带作物学报

作者：彭存智, 常丽丽, 王丹, 黄超, 徐兵强, 仝征

单位：1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南海口 571101,2.中国热带农业科学院海口实验站（热带果树研究所），海南海口 571101

关键词：香蕉枯萎病,内源启动子,分泌表达载体,Six1d蛋白

基金：海南省自然科学基金项目(320RC707),海南省自然科学基金项目(321RC635),中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1630052022010)

前期研究中构建的真菌分泌表达载体p74HSP-EGFP可在真菌中表达目标蛋白，在真菌侵染并定殖植物的过程中分泌目标蛋白到植物中，从而验证目的基因的功能，但p74HSP-EGFP载体中驱动目的基因表达的毒素基因（toxin A, ToxA）启动子不是尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Foc）自身的启动子。为能在Foc中更有效地表达其自身基因，本研究从尖孢镰刀菌1号生理小种（Foc1）中克隆到高丰度表达的木质部分泌蛋白基因（secreted in xylem 1d, Six1d）的启动子，来替换p74HSP-EGFP载体中的ToxA启动子，并将新构建的真菌分泌表达载体命名为pSix1d74HSPG。为比较2个分泌载体的表达效率，本研究进一步将p74HSP-EGFP和pSix1d74HSPG载体转化尖孢镰刀菌热带4号生理小种（Foc TR4），获得的转化菌株分别在钾盐液体培养基（KK）中振荡培养5 d后，检测分泌到胞外的EGFP荧光强度和EGFP蛋白的表达量。结果显示，pSix1d74HSPG中Six1d启动子驱动的EGFP表达强度能够达到p74HSP-EGFP中ToxA启动子驱动的1.6~1.7倍，说明pSix1d74HSPG载体可代替p74HSP-EGFP载体在Foc中更高效分泌表达目的蛋白，为香蕉枯萎病抗感病分子机理研究提供重要的实验工具。

来源：2023年第6期

《热带作物学报》期刊编辑部

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