热带作物学报

作者：谢秀菊, 夏启玉, 刘帅, 麦贤俊, 贾瑞宗, 郭安平, 徐志胜, 李峰, 孔祥义, 赵辉

单位：1.中国热带农业科学院三亚研究院/中国热带农业科学院热带生物技术研究所/海南省南繁生物安全与分子育种重点实验室，海南三亚 572024,2.南京农业大学，江苏南京 210095,3.三亚市热带农业科学院，海南三亚 572022,4.山东舜丰生物科技有限公司，山东济南 250300

关键词：转基因番木瓜,拷贝数,内参基因,数字PCR,荧光定量PCR

基金：三亚市科技创新专项(2022KJCX21),海南省重大科技计划项目“南繁育种区生物安全防控”(ZDKJ202002),海南省院士创新平台资助项目

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交，该方法成本高、周期长，难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求，因此，本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770，以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照，利用数字PCR鉴定其拷贝数，进一步以其为内参基因，以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因，建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明：Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因；建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠，而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高，对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低，因此，荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因，且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法，操作简单，速度快，适合批量检测，可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。

来源：2024年第4期

《热带作物学报》期刊编辑部

查看热带作物学报杂志2024年第4期