热带作物学报

作者：秦磊, 张绪风, 袁鸿超, 郭技星, 周祥

单位：海南大学热带农林学院/热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室，海南儋州 571700

关键词：红火蚁,重组聚合酶扩增,可视化,快速检测,灵敏度

基金：崖州湾种子实验室揭榜挂帅项目(B21HJ0905)

红火蚁（Solenopsis invicta）是一种原产于南美洲的严重入侵害虫，目前已在我国广泛分布，对农业、自然生态系统及公共卫生造成严重威胁。出入境检疫作为防止红火蚁入侵和扩散的关键环节，需要在短时间内对检疫对象进行准确鉴定。现有红火蚁鉴定方法包括形态学鉴定、DNA条形码、免疫检测及环介导等温扩增等技术，这些技术均存在一定局限性，在简便性、检测时间和灵敏度等方面难以满足快速检测的要求。重组聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification, RPA）是一种具有反应条件简单、灵敏度高及扩增效率高的等温扩增技术。为实现红火蚁快速、准确的现场检测，本研究基于RPA技术，建立了一种红火蚁可视化快速检测方法。通过分析NCBI数据库中红火蚁及其近缘种、形近种的线粒体基因组序列，比对后选取线粒体NADH2脱氢酶基因作为扩增目标，并设计了RPA特异性引物。结果表明：设计引物对红火蚁具有高度特异性；琼脂糖凝胶电泳检测的RPA反应灵敏度达到1.0×10‒4 ng/μL，为PCR反应灵敏度的1.0×103倍。同时通过检测添加核酸染料后的荧光反应开发了可视化检测技术，可视化荧光检测的灵敏度约为1.0×10‒1 ng/μL。最后本研究探索了DNA样品的快速提取方法，采用无菌超纯水研磨蚂蚁样品，并在100 ℃水浴加热1 min条件下成功粗提DNA，取代传统DNA提取过程。本方法可在37 ℃下完成对红火蚁基因的扩增，并通过荧光反应判断检测结果，30 min内完成对红火蚁的快速检测，为红火蚁的检疫和防控提供了方便、快速、准确、可靠的技术支持。

来源：2025年第6期

《热带作物学报》期刊编辑部

查看热带作物学报杂志2025年第6期