热带作物学报

作者：张海越, 路洁, 高保森, 王洪星

单位： 海南大学热带农林学院， 海南儋州 571737, 海南大学南繁学院（三亚南繁研究院）， 海南三亚 572025

关键词：APV1,病毒提纯,聚乙二醇,密度梯度离心,抗血清制备

基金：三亚崖州湾科技城管理局“崖州湾”菁英人才科技专项(SCKJ-JYRC-2023-11),国家自然科学基金项目(32160373)

槟榔黄化相关病毒（Areca palm velarivirus 1, APV1）引起的槟榔黄化病严重危害槟榔种植业，为防控槟榔黄化病的快速蔓延，亟需开发APV1病毒的快速检测技术。本研究以APV1侵染性克隆侵染的本氏烟草（Nicotiana benthamiana）作为分离提纯APV1病毒粒子的材料，利用聚乙二醇沉淀法、超速离心沉淀法、不连续蔗糖密度梯度离心法、亲和磁珠法等方法分离提纯APV1；利用透射电镜观察、SDS-PAGE、Western blot等方法鉴定提纯APV1病毒粒子的质量，将提纯的APV1病毒粒子免疫BALB/c小鼠制备APV1多抗血清用于APV1病毒检测。结果表明：使用5%聚乙二醇6000（PEG-6000）和0.6% NaCl（m/V）可以将APV1病毒粒子从烟草匀浆液中充分沉淀，重悬经55%蔗糖垫超速离心后，APV1病毒粒子分布于蔗糖层下部或沉淀于离心管底部；粗提纯的APV1病毒粒子经30%、40%、50%、60%、70%不连续蔗糖密度梯度140 000×g离心2 h进行精提纯，分级取样检测显示APV1病毒粒子富集于60%、70%蔗糖层；亲和磁珠可以富集APV1病毒粒子，但洗脱时少量抗体脱落影响病毒纯度。提纯的病毒粒子在透射电镜下呈细长线形，长为650~2200 nm，直径为10~13 nm；将提纯的APV1病毒粒子免疫小鼠，获得对APV1高度特异、效价为1∶25 600的抗血清。该研究结果为APV1的分离提纯提供新的思路，为APV1病毒快速检测提供重要的技术支撑。

来源：2025年第9期

《热带作物学报》期刊编辑部

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